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放大字体  缩小字体 发布日期:2013-04-23  来源:兽药市场指南  作者:李定刚  浏览次数:3118在线投稿
中兽医认为大肠杆菌是由一种天地间不正之气“疠气”侵犯机体而造成的,又叫“疫疠”。引起机体自身正气不足、营卫不固,按照中兽医辨证论治原则,治疗上应以燥湿解毒、活血化瘀、清热生津为主,以健脾养胃、行气利水、养阴止痢为辅。连葛口服液对由鸡大肠杆菌引起的“里热证、泻痢证”模型具有良好的疗效。

鸡大肠杆菌病是危害养禽业的主要传染病之一。中兽医认为,由大肠杆菌引起的传染病称之为“瘟疫”或者“疫病”,认为它是由一种天地间不正之气“疠气”侵犯机体而造成的,又叫“疫疠”。当鸡群受到应激、饲料营养不足或感染其他疾病时,引起自身正气不足、营卫不固,使外邪有机可乘,造成疫毒入侵,随后病邪会随气血入里,进入肺、肠、心、肝等五脏六腑,最终造成血淤气滞、热毒壅积、阴阳俱损。按照中兽医辨证论治原则,治疗上应以燥湿解毒、活血化瘀、清热生津为主,以健脾养胃、行气利水、养阴止痢为辅。

保定冀中药业香港六合彩根据上述中医组方原则,成功研制出国家三类新兽药“连葛口服液”。新兽药证书号为:(2013)新兽药证字4号。该产品具有清热燥湿,泻火解毒之功效,用于鸡大肠杆菌病的预防与治疗。现将该新兽药的主要情况报道如下:

一、处方来源与组成

“连葛口服液”是由经典中药方剂“葛根芩连汤”改良而成的具有清热解毒、燥湿止痢、活血化瘀、抗菌消炎等作用的新型中草药制剂。“葛根芩连汤”出自东汉·张仲景的《伤寒论》,由葛根、黄芩、黄连、甘草4味药组成,具有清热燥湿、升清止泻之功效。在分析该方剂各味药的药性、相互作用以及联合治疗功效的基础上,由“葛根芩连汤”进一步改良制成。

鸡大肠杆菌病是由致病性血清型大肠杆菌引起的各种症候的总称,不同品种不同日龄的鸡均可发病。其临床表现多种多样,如食欲下降、精神沉郁、腹泻等,剖检多见肝周炎、心包炎、腹膜炎、气囊炎、脐炎、眼炎和大肠杆菌肉芽肿等病变。按中兽医理论属于湿热泄泻,多由外感暑湿、疫毒之邪,或饮食不洁,湿热郁结肠内,胃肠受损,运化失常,湿热内生,致使气血阻滞,湿郁热蒸,肠胃气化被阻,气血与暑湿热毒博结,而成湿热泄泻,治疗时宜选择燥湿解表,健脾补中,清热解毒,生津止泻类中药。

连葛口服液”正是根据这一观点进行组方达到清热解毒、燥湿止痢、活血化瘀、抗菌消炎等作用该方由黄连、黄芩、葛根、甘草、大黄5味药组成,以黄连为君药,取其大苦能燥湿、大寒可泻热之功;以黄芩、葛根同为臣药,黄芩具有清热燥湿,泻火解毒之功,葛根可退热生津、升阳止泻,二者共助黄连之功;以甘草为佐药,补脾益气,并助君臣攻而不致伤正、补亦不致助邪;以大黄为使药,既可活血化瘀、通肠泻热、推陈出新、快速排出毒素,又引诸药入脾、胃、大肠经,共奏解表退热、通肠排毒之功。

二、质量控制技术

    在质量控制中,针对黄连、黄芩、葛根和大黄4味药材分别设计相应的薄层鉴别方法,并对盐酸小檗碱和黄芩苷都采用高效液相色谱法进行含量控制。要求本品每1 mL含黄连以盐酸小檗碱(C20H17NO4∙HCl)计,不得少于1.70 mg;含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计,不得少于4.90 mg。从而,有效保证产品质量。

三、用法用量与临床应用效果

该产品在临床中的用法与用量为:每1kg体重,鸡,1 mL,连用35日。在临床试验中,采用人工诱发鸡大肠杆菌病的病理模型,进行了连葛口服液对鸡大肠杆菌病的疗效研究。结果表明:连葛口服液高(1.5ml/kg)、中剂量组(1.0ml/kg)对人工诱发鸡大肠杆菌病的防治效果良好,其保护率分别为84%82%,与氟苯尼考疗效相当,且高、中剂量两组无显著性差异,所以,以中剂量为推荐治疗剂量。

(一)材料与方法

1、试验动物

1日龄伊莎褐蛋鸡500只,购于石家庄金羽祖代鸡场。使用不含任何抗菌药物的雏鸡饲料,按《中华人民共和国农业部颁布NY/T33-2004 蛋鸡饲养标准》饲养至15日龄。以活泼健康、体重均匀为标准,选取90只用于鸡大肠杆菌病造模试验,300只用于连葛口服液治疗试验。

2、试验药品和试剂

连葛口服液,保定冀中药业香港六合彩中试生产,主要成分:黄连、黄芩、葛根、甘草、大黄;

氟苯尼考可溶性粉,购于张家港市恒盛药用化学香港六合彩;

麦康凯琼脂,购于杭州天和微生物试剂香港六合彩;

营养琼脂,购于杭州天和微生物试剂香港六合彩;

营养肉汤,购于北京双旋微生物培养基制品厂;

细菌微量生化反应管,购于杭州天和微生物试剂香港六合彩;

大肠杆菌O因子诊断血清,购于中国兽医药品监察所。

3、试验菌种

鸡源大肠杆菌O1型标准菌株(CVCC249),购自中国兽医药品监察所菌种室。

4、主要仪器

电热鼓风干燥箱,北京市永光明医疗仪器厂;生化培养箱(SPX-250B-Z),上海博迅实业香港六合彩医疗设备厂;恒温培养振荡器(ZHWY-103D),上海智城分析仪器制造香港六合彩;电子天平(MR200A),上海第二天平仪器厂;超净工作台(LGJ-10),北京四环科学仪器厂。

5、试验方法

攻毒预试验

先将保存的鸡大肠杆菌O1型菌株接种到血琼脂平板,再挑选典型菌落接种于肉汤中,将分离纯化后的肉汤培养液作为攻毒菌。

随机选取9015日龄伊莎褐蛋鸡,分为18组,分别以原细菌培养液、10-110-210-310-410-5稀释液为攻毒液,胸部肌肉注射攻毒,每个稀释度分1m10.5m10.25m1三个剂量,接种后观察各组试验鸡的精神、采食、饮水、粪便、呼吸等临床情况;对死亡鸡进行病理剖检,取肝脏做细菌分离培养。观察48小时,记录死亡情况。以半数致死量作为攻毒剂量。

治疗试验

试验动物分组和处理  300只雏鸡随机分为6组,每组50羽,待稳定后进行试验。根据预试验结果确定攻毒菌液稀释浓度和剂量,除阴性对照组外,每组鸡胸肌注射该剂量的鸡大肠杆菌O1菌液。攻毒后,观察各阳性对照组鸡的精神、采食、饮水、呼吸、粪便等临床表现,待出现典型湿热泄泻症候(精神萎靡不振,羽毛蓬乱,离群呆立,食欲废绝,腹泻,粪便呈黄绿色水便)时开始混饮用药。其中第13组用连芩止泻口服液治疗,分别以高剂量(第1组,1.5ml/kg体重)、中剂量(第2组,1.0ml/kg体重)和低剂量(第3组,0.5ml/kg体重)饮水给药;第4组为药物对照组,用氟苯尼考可溶性粉(20mg/kg体重)混饮;第5组为阳性对照组,攻毒不给药;第6组为阴性对照组,不攻毒不给药。药物治疗组连续用药5天,各组存活鸡第7天全部扑杀。试验动物分组及处理见表1

1  试验动物分组及处理

组别

羽数/

接种方法

接种

菌量

药物

剂量

给药

方法

1组(连葛高剂量组)

50

胸肌注射

0.5mL

连葛口服液

1.5mL/kg

混饮

2组(连葛中剂量组)

50

胸肌注射

0.5mL

连葛口服液

1.0mL/kg

混饮

3组(连葛低剂量组)

50

胸肌注射

0.5mL

连葛口服液

0.5mL/kg

混饮

4组(氟苯尼考组)

50

胸肌注射

0.5mL

氟苯尼考可溶性粉

20mg/kg

混饮

5组(阳性对照组)

50

胸肌注射

0.5mL

6组(阴性对照组)

50

 

    试验期间每天定时观察并记录试验鸡的临床症状变化、死亡、增重情况,对死鸡作病理剖检和细菌分离、生化鉴定、O抗原测定。计算各组的保护率、治愈率、死亡率,于接种细菌前和试验结束时分别称量各组鸡的体重,计算相对增重率,并对各组间的上述指标进行统计学分析。

疗效评价指标

死亡率:凡在试验期间,出现鸡大肠杆菌病的典型湿热泄泻证(精神萎靡不振,羽毛蓬乱,离群呆立,食欲废绝,粪便呈黄绿色水便,少数粪便带血)并死亡;尸体剖检心脏、肝脏等有典型病变特征;并从肝脏、脾脏及肠系膜淋巴结中分离出大肠杆菌,判为死亡,试验结束时每组死亡鸡只数占该组试验鸡数的百分率为死亡率;

保护率:经用药后,湿热泄泻症侯有所缓解或痊愈均为保护,试验结束时每组存活鸡只数占该组试验鸡数的百分率为保护率;

治愈率:在试验期间,鸡经混饮给药后,精神状态、食欲、饮水恢复正常,体重增加,不再出现腹泻等临床症状,剖检无任何病变属治愈。试验结束时每组治愈鸡只数占该组试验鸡数的百分率为治愈率;

相对增重率:试验期间各试验组增重占阴性对照组增重的百分比。阴性对照组增重设为100%

数据的分析和处理

对试验数据进行显著性检验,其中死亡率、保护率及治愈率用x2检验;增重采用t检验。

(二)结果

 1、攻毒预试验

人工感染大肠杆菌约8小时后,各试验组鸡均出现不同程度的鸡大肠杆菌病典型症状:精神不振、腹泻、眼结膜潮红、食欲减退至废绝等。12小时后开始出现死亡,从病死鸡肝脏可分离到细菌,经生化鉴定为大肠杆菌。攻毒鸡的死亡情况见表2

2 不同剂量、不同稀释度攻毒死亡鸡只数

     死亡数

剂量

原液

10-1

10-2

10-3

10-4

10-5

1mL

5

5

5

5

4

2

0.5mL

5

5

5

4

3

2

0.25mL

5

5

4

3

2

1

为了更好的评价药物对鸡大肠杆菌病的预防效果,故在建立动物疾病模型时应选择适当的攻毒液浓度和用量,尽量达到动物发病但不死亡的理想效果。本试验选择半数致死量作为攻毒的最佳剂量。根据试验结果,选用攻毒浓度为细菌培养液10-4稀释液,剂量为0.5mL/只。

2、治疗试验

临床症状及死亡情况

除阴性对照组外其他各组雏鸡在攻毒约8小时后陆续发病,出现不同程度的鸡大肠杆菌病的典型症状(湿热泄泻证的证侯),主要表现为精神不振、羽毛松乱、两翼下垂、头颈缩入、闭眼昏睡、不愿走动、离群呆立、不同程度的腹泻、眼结膜潮红、食欲减退,严重者食欲废绝、卧地不起等。

阳性对照组在攻毒12小时开始出现死亡,2448小时达到高峰,以后数日中,仍有鸡陆续死亡,全组大部分动物在整个试验过程中精神不振,食欲减少,拉白色稀粪。连葛口服液低剂量治疗组的动物在2448小时间死亡较多,但随后的观察中没有再出现死亡,鸡只精神较好,采食饮水略差,多数在第7日后基本正常。中剂量、高剂量和氟苯尼考治疗组的动物在攻毒后也出现死亡,但死亡动物较少,且72小时后开始恢复,至试验结束多数鸡只精神、饮食恢复正常。试验各组在攻毒后144小时均没有再出现死亡现象。阴性对照组在整个试验过程中精神状态、食欲饮水正常,没有出现动物死亡现象。死亡情况见表3.

3 各组鸡不同时间死亡数量(只)

 

0-12

12-24

24-36

36-48

48-60

60-72

72-96

96-120

120-144

144-168

1组(高剂量组)

0

1

2

2

2

1

0

0

0

0

2组(中剂量组)

0

1

2

3

2

0

1

0

0

0

3组(低剂量组)

1

2

3

5

2

1

1

0

0

0

4组(氟苯尼考组)

1

1

3

3

1

1

0

0

0

0

5组(阳性对照组)

2

4

6

7

3

2

1

0

1

0

6组(阴性对照组)

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

剖检病变

剖检病死鸡出现鸡大肠杆菌病的典型病变:气管黏液增多,肝脏大多有散在的出血点,病程稍长的表现出典型纤维素性心包炎、肝周炎变化,同时伴有肠黏膜肥厚,肠腔有多量黄色泡沫,肾脏稍肿。

分离菌株鉴定   

从病死鸡肝脏可分离到细菌,经革兰氏染色镜检可见红色阴性小杆菌,多数单个散在,个别成双排列,两端钝圆,边缘整齐,表面光滑湿润,符合大肠杆菌的形象特征。经生化试验鉴定为大肠杆菌(结果见表4),血清学鉴定O抗原型为O1

4  分离菌生化鉴定结果

VP

MR

靛基质

H2S

葡萄糖

乳糖

麦芽糖

蔗糖

甘露醇

枸橼酸盐

-

+

+

-

-

药物治疗结果

各药物治疗组饮水给药后的1周内,各组的治愈率、保护率、死亡率及相对增重率结果见表5

5  连葛口服液对人工感染鸡大肠杆菌病的疗效

 

死亡数

死亡率%

治愈率%

保护率%

相对增重率%

1组(连葛高剂量组)

8

16Bc

76 Aa

84 Aa

85.85 Bb

2组(连葛中剂量组)

9

18 Bc

70 ABa

82Aa

84.84Bb

3组(连葛低剂量组)

15

30 Bb

56 Bb

70 Ab

74.19 Bc

4组(氟苯尼考组)

10

20 Bbc

72ABa

80Aab

82.35 Bb

5组(阳性对照组)

26

52Aa

8*Cc

48*Bc

10.54 Cd

6组(阴性对照组)

0

--

--

--

100.0 Aa

*:自愈或症状自行缓解

注:大写字母不同代表组间差异极显著(p<0.01);小写字母不同代表组间差异显著(p<0.05

统计学分析结果表明:四个药物治疗组(连葛口服液高、中、低剂量组,氟苯尼考组)的死亡率、治愈率、保护率、相对增重率与阳性对照组相比较差异极显著(P<0.01),因此,临床试验结果表明,连葛口服液高中低3个剂量及氟苯尼考均对人工感染鸡大肠杆菌病有一定的防治效果。

连葛口服液低剂量组在治愈率、相对增重率方面与氟苯尼考组相比差异显著(p<0.05),说明低剂量的连葛口服液对人工感染鸡大肠杆菌病的防治效果不佳,不及氟苯尼考;而连葛口服液高、中剂量组与氟苯尼考组相比,死亡率、治愈率、保护率、相对增重率方面均为差异不显著(P>0.05),说明高、中剂量的连葛口服液对人工感染鸡大肠杆菌病的防治效果与氟苯尼考相当;连葛口服液高、中剂量两组之间各项指标差异不显著(P>0.05),表明对人工感染鸡大肠杆菌病的防治效果无显著差异。

综合各项指标,连葛口服液高、中剂量组对人工感染鸡大肠杆菌病的防治效果良好,与氟苯尼考疗效相当。高、中剂量两组在各项统计指标中无显著性差异,所以,以中剂量为推荐剂量。

3、讨论

鸡大肠杆菌病的治疗药物
   
鸡大肠杆菌病是鸡的一种常见传染病,目前该病的防治多以使用抗菌的化学药物为主,但随着时间的延长,大肠杆菌对抗菌的化学药物的耐药性问题越来越突出。另外,畜产品无公害化生产的要求,使抗生素的选择范围越来越小。而中药治疗效果受菌株耐药性的影响较小,且毒性小、副作用小、几乎无残留,所以研究应用中药防治鸡大肠杆菌病有重要的现实意义。

鸡大肠杆菌病辩证施治
   
鸡大肠杆菌病按中兽医理论类属于湿热壅积肠道的里热证、泄泻证,多由外感暑湿、疫毒之邪,或饮食不洁,湿热郁结肠内,胃肠受损,运化失常,湿热内生,致使气血阻滞,湿郁热蒸,肠胃气化被阻,气血与暑湿热毒博结,而成湿热泄泻,治宜健脾补中,清热解毒,燥湿止痢。连葛口服液正是根据这一观点进行组方所组的复方制剂具有较强的清热解毒和杀菌作用还能综合调理机体的各种生物机能,增强机体免疫力。

连葛口服液对鸡大肠杆菌病的疗效作用

连葛口服液是由经典中药方剂葛根芩连汤改良而成的具有清热解毒、燥湿止痢、活血化瘀、抗菌消炎等作用的新型中草药制剂。是由黄连、黄芩、葛根、甘草、大黄5味药组成,方中以黄连为君药,取其大苦能燥湿、大寒可泻热之功,发挥清热解毒、燥湿止痢的作用;以黄芩、葛根同为臣药,黄芩具有清热燥湿,泻火解毒之功,葛根可退热生津、升阳止泻,二者共助黄连清热解毒、燥湿止泻之功;以炙甘草为佐药,补脾益气,使君臣药物攻而不致伤正、补亦不致助邪;以大黄为使药,既可增强君臣药物燥湿解毒之功,又能活血化瘀、通肠泻热、推陈出新、快速排出毒素,同时引诸药入脾、胃、大肠经。诸药同用,共奏清热燥湿、通肠排毒之功。故而对由大肠杆菌引起的湿热壅积肠道的湿热泻痢证候模型具有较好的治疗作用。

连葛口服液采用饮水给药,这种给药方式比混料方便,同时鸡只发病时往往引起采食量下降,但饮水量下降不明显,因而饮水给药能保证鸡体内药物的有效浓度,从而达到较好的疗效。

4、结论

试验结果表明,连葛口服液对由鸡大肠杆菌引起的“里热证、泻痢证模型具有良好的疗效。其中高、中剂量治疗组的保护率达84%82%,其效果与添加20mg/kg氟苯尼考可溶性粉效果相当。

根据本试验结果,考虑经济成本,以中剂量为推荐剂量。其具体用法用量为:鸡,混饮,1.0mL/kg体重,连续用药5天,用于治疗鸡大肠杆菌病。

(实习记者 兽药营销网 李岩石)

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